Auteurs:
Estelle Adam, Emma Jenkins, Floriane Laurent, Jennifer Hillman, Maureen West, Emma Stanley, David Sanford, Min Fang, Agnieszka Kownacka, Celine Mothes, Alexandra Oudot, Vincent
Matthew, David Gilfoyle, Barry Jones, William Bachovchin, Amrik Basran, Cyril Berthet
Abstract:
Le Cell Death-Ligand 1 (PD-L1), programmé, fait partie du système de point de contrôle immunitaire impliqué dans la prévention de l’auto-immunité. PD-L1 est régulé positivement sur les cellules tumorales et se lie à ses récepteurs, PD-1, exprimés par les cellules immunitaires du microenvironnement tumoral. Les immunothérapies anti-PD-L1 se sont révélées efficaces à la fois en monothérapie et en association avec des chimiothérapies et des radiothérapies, fournissant des réponses à long terme chez un sous-ensemble de patients. Nous avons développé un antagoniste PD-L1 Affimer qui pourrait se différencier des mAb actuellement approuvés cliniquement en raison de sa plus petite taille, de sa pénétration tissulaire améliorée et de ses voies d’administration alternatives telles qu’une injection sous-cutanée. Cela ouvre également la possibilité de générer des traitements antagonistes PD-L1 supplémentaires tels que des bispécifiques et des fusions de cytokines.
L’échafaudage biothérapeutique Affimer est une protéine monomère de 14 kDa basée sur l’inhibiteur de protéase humaine Stefin A, dépourvue de modifications post-traductionnelles telles que des liaisons disulfure et une glycosylation. Nous avons identifié une gamme de liants compétitifs de haute affinité pour le PD-L1 humain, confirmés par SPR à l’aide d’un antigène formaté Fc, d’un test ELISA de compétition et du blocage de l’axe PD-L1/PD-1 à l’aide de divers tests cellulaires. Modèle d’inhibition de la croissance tumorale PD-L1 MC38 et comparé aux thérapies par anticorps PD-L1 approuvées. La pharmacocinétique (PK) et la biodistribution sont des paramètres clés qui influencent l’efficacité et la sécurité des protéines thérapeutiques. L’extension de la demi-vie des protéines Affimer principales a été obtenue par fusion à une région Fc humaine d’une IgG (désignée AVA004).
L’analyse pharmacocinétique des molécules AVA004 Fc a été réalisée chez des souris C57Bl/6, humanisées FcRn/HSA et cynomolgus après une administration intraveineuse unique.
La distribution tissulaire après administration intraveineuse d’AVA004 Fc à des souris NOG humanisées portant des cellules tumorales orthotopiques MDA-MB-231 a été évaluée en utilisant du 125I-AVA004 Fc radiomarqué. Des études d’imagerie de biodistribution ont été menées chez des souris portant des cellules tumorales A375 en utilisant IRDye800 conjugué à AVA004 Fc, suivies d’une imagerie ex vivo. Une étude de biodistribution plus quantitative a été menée dans le même modèle en utilisant l’imagerie SPECT de molécules AVA004 Fc bioconjuguées DOTAGA radiomarquées au 111Indium. La biodistribution par imagerie nous a permis de sélectionner la molécule la plus favorable en fonction de ses ratios tumeur/plasma et tumeur/foie.